產(chǎn)品展示PRODUCTS
NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)
更新時間:2024-06-26
訪問量:727
廠商性質(zhì):代理商
生產(chǎn)地址:
NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)細(xì)胞特性
1) 來源:人 來源于轉(zhuǎn)移灶:胸腔積液
2) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
3) 形態(tài):上皮樣、懸浮成團
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用。
NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)運輸和保存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1) 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基)。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基 87%
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%
GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1%
P/S青霉素-鏈霉素 1%
備注:nci-h82 細(xì)胞懸浮聚集體,細(xì)胞以非常大的聚集體生長,聚集體是唯1的活細(xì)胞群
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完-全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完-全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完-全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完-全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個/mL(不同細(xì)胞對密度要求不同,)可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完-全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。
下面T25瓶為例;
1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。